Sanger試劑是指DNFB。在弱堿性溶液中,氨基酸的α-氨基很容易與2,4-二硝基氟苯作用,生成穩定的黃色2,4-二硝基苯氨基酸。該反應由F. Sanger首先發現,所以此反應又稱桑格反應(Sanger reaction),2,4-二硝基氟苯被稱為Sanger試劑。
什麼是sanger試劑
Sanger試劑是指DNFB。
在弱堿性溶液中,氨基酸的α-氨基很容易與2,4-二硝基氟苯作用,生成穩定的黃色2,4-二硝基苯氨基酸。該反應由F. Sanger首先發現,所以此反應又稱桑格反應(Sanger reaction),2,4-二硝基氟苯被稱為Sanger試劑。
由於硝基苯與氨基結合牢固,不易被水解,因此當DNP-多肽被酸水解時,所有肽鍵均被水解,隻有N-末端氨基酸仍連在DNP上,所以產物為黃色的DNP-氨基酸和其它氨基酸的混合液。
混合液中隻有DNP-氨基酸溶於乙酸乙酯,所以可以用乙酸乙酯抽提並將抽提液進行色譜分析,再以標準的DNP-氨基酸作為對照鑒定出此氨基酸的種類。因此2,4-二硝基氟苯法可用於鑒定多肽或蛋白質的N-末端氨基酸。
sanger反應
在弱堿性(pH 8~9)、暗處、室溫或40℃條件下,氨基酸的α-氨基很容易與2,4-二硝基氟苯(縮寫為FDNB或DNFB)反應,生成黃色的2,4-二硝基苯氨基酸(dinitrophenyl amino acid,簡稱DNP-氨基酸)。
多肽或蛋白質的N-末端氨基酸的α-氨基也能與FDNB反應,生成一種二硝基苯肽(DNP-肽)。由於硝基苯與氨基結合牢固,不易被水解,因此當DNP-多肽被酸水解時,所有肽鍵均被水解,隻有N-末端氨基酸仍連在DNP上,所以產物為黃色的DNP-氨基酸和其它氨基酸的混合液。
混合液中隻有DNP-氨基酸溶於乙酸乙酯,所以可以用乙酸乙酯抽提並將抽提液進行色譜分析,再以標準的DNP-氨基酸作為對照鑒定出此氨基酸的種類。因此2,4-二硝基氟苯法可用於鑒定多肽或蛋白質的N-末端氨基酸。